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本生淺談:酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試驗(yàn)辦法
更新時(shí)間:2023-05-25瀏覽:858次

  本生淺談:酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試驗(yàn)辦法


  酶聯(lián)免疫測定是將抗原抗體反響的高度特異性和酶的催化作用相結(jié)合,開展建立一種非放射性符號免疫分析辦法。因?yàn)镋LISA具有靈敏度高、特異性強(qiáng),酶免疫試劑的性質(zhì)比較穩(wěn)定,操作辦法簡潔快速、無放射性污染以及應(yīng)用范圍廣等很多優(yōu)點(diǎn),在醫(yī)學(xué)根底理論研究,病毒學(xué)和生物化學(xué)查驗(yàn)等工作中應(yīng)用十分廣泛。

  該法需將純化的抗原包被在固相載體,與必定稀釋度的待側(cè)血清反響,然后與酶符號的第二抗體(抗人IgG,IgA,IgM或抗人IgG.A.M的混合物)反響,酶可催化色原反響,在酶標(biāo)測定儀必定波長下進(jìn)行比色,測定吸光度。

  ELISA試劑盒的關(guān)鍵是要具備高質(zhì)量純化或重組的抗原,對生產(chǎn)廠家的抗原要求很高。因?yàn)榧兓幕蛑亟M的抗原越來越多,以及商品化的高質(zhì)量的ELISA試劑盒的面市,它應(yīng)用于臨床免疫試驗(yàn)室的本身抗體的檢測已日漸增多,該法檢測本身抗體快速、靈敏及特異性高。


試劑盒1.jpg


  一、免疫熒光法----本身抗體確診的標(biāo)準(zhǔn)技能(IFA)

  免疫熒光測定法可分為直接和直接兩類,在本身抗體檢測中,以直接免疫熒光法zui為常用。因?yàn)楸旧砜乖姆轿粵Q議了其相應(yīng)的抗體的典型熒光形式,該法能經(jīng)過顯微鏡觀測地判別安排或細(xì)胞內(nèi)熒光的分布。

  將已稀釋血清與試驗(yàn)基質(zhì)進(jìn)行溫育,令特異性抗體與試驗(yàn)基質(zhì)中相應(yīng)抗原結(jié)合,然后再與熒光符號的第二抗體溫育,zui后在熒光顯微鏡下觀察相應(yīng)部位的特異性熒光形式。

  此辦法靈敏、重復(fù)性好。但需要一臺(tái)質(zhì)量較好的熒光顯微鏡,且對操作人員要較高,操作雜亂耗時(shí)長,繁瑣。

  二、免疫印跡法(Immunoblot assay)(westerblot)

  此法是將聚丙xi酰胺凝膠電泳別離蛋白及多肽與免疫反響的高特異性相結(jié)合的一項(xiàng)技能。蛋白質(zhì)在電泳中依分子量大小別離,然后將別離好的蛋白轉(zhuǎn)印到硝酸纖維薄膜上,用酶符號的抗體或蛋白A進(jìn)行染色。該法簡單、快速。是現(xiàn)在美國、中國等國際上很多國家衛(wèi)生機(jī)構(gòu)的zui終承認(rèn)辦法。但其制備辦法繁瑣、本錢相對較高。

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